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常規(guī)反相分析色譜柱新色譜柱開啟和安裝的推薦步驟

更新時間:2025-01-13      點擊次數(shù):275

何謂常規(guī)反相色譜柱?

  那些在硅膠或雜化基質(zhì)顆粒上鍵合了如C18、C8、C4或苯基等鍵合相的色譜填料所裝填的色譜柱,按反相色譜條件進(jìn)行操作和分離。C18是反相液相色譜柱中使用較為廣泛的一款色譜柱,使用維護(hù)參考如下。

常規(guī)反相分析色譜柱新色譜柱開啟和安裝的推薦步驟:

1. 使用新鮮潔凈的水與乙腈。沖洗系統(tǒng),確保系統(tǒng)干凈,不含任何緩沖鹽和污染物。

2. 取用色譜柱時避免磕碰掉落。

3. 將色譜柱入口端連接到系統(tǒng)上,柱出口端先不要連接,色譜柱身上有箭頭標(biāo)明正確流向。

4. 0.1 mL/min流速條件下用純乙腈潤洗色譜柱,然后在2分鐘內(nèi)將流速升至0.5 mL/min。

5. 當(dāng)溶劑均勻的從柱出口端流出,停流速,將色譜柱出口端接到系統(tǒng)檢測器上(這樣可以避免氣泡進(jìn)入檢測系統(tǒng),并且可快速達(dá)到基線平衡)。

6. 重啟流速,按照步驟4的方法逐漸提高流速,至常規(guī)分析時所使用的流速。

7. 參考柱效測試報告中的方法,使用該流動相條件平衡色譜柱,通常需要使用5-10倍柱體積的流動相,直至壓力與基線穩(wěn)定。

8. 測試柱效。如果沒有柱效測試報告中的分析物,請聯(lián)系沃特世化學(xué)消耗品部門尋求支持,使用合適的濃度與進(jìn)樣量。柱效結(jié)果略低于

柱效測試報告屬正常情況。如結(jié)果明顯偏低、峰形拖尾,提示色譜柱和/或所使用的液相系統(tǒng)處于非理想狀態(tài),需要進(jìn)行故障排查。

 

  當(dāng)使用2.1 mm內(nèi)徑色譜柱時,建議優(yōu)化系統(tǒng)以減少譜帶展寬,包括:使用檢測器微量流通池,減少進(jìn)樣器loop環(huán)體積,使用較小內(nèi)徑(0.005’’0.12 mm)的系統(tǒng)管路。并確保管路與色譜柱連接恰當(dāng)、無死體積。

 

  當(dāng)使用小顆粒填料(2.5 μm)短柱進(jìn)行高效快速分離時,需要考慮以下因素:

確保管路與色譜柱連接恰當(dāng)、無死體積,盡量優(yōu)化系統(tǒng)減少譜帶展寬;

●提高采樣頻率至10/秒以上;

●較小粒徑的色譜柱產(chǎn)生的柱壓較高,而較小粒徑要達(dá)到理想的色譜效率所需的線速度較高,請根據(jù)所用LC系統(tǒng)的實際情況調(diào)節(jié)流速;

●可使用較高的柱溫來補償小顆粒造成的壓力升高,例如40℃。使用雜化顆粒反相色譜柱時,可使用45℃或更高。


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